Margot Robbie er tilbage i rollen som Harley Quinn, der blev introduceret i Suicide Squad.

Harley Quinn fortæller den kringlede historie om Gothams ondskabsfulde, selvoptagede skurk, Roman Sionis (Black Mask), og hans fanatiske højre hånd, Zsasz, der udser sig den unge pige Cass som mål. Mens han leder efter hende, støder Harley på Birds of Prey.