Efter at have reddet Xandar fra Ronans vrede, er Guardians nu anerkendt som helte. Nu er det tid til at holdet skal hjælpe deres leder Star Lord (Chris Pratt) med at afdække sandheden bag hans sande arv.

Undervejs vender gamle fjender sig til allierede og forræderi blomstrer. Nu finder Guardians ud af, at de står over for en ødelæggende ny trussel, som er ude på at styre hele galaksen.